EdU（動(dòng)物注射）

產(chǎn)品描述
細(xì)胞增殖是評(píng)價(jià)細(xì)胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物，其連有的炔烴基團(tuán)在天然化合物中很少見，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng)，把熒光基團(tuán)標(biāo)記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣可以進(jìn)行高效快速的檢測(cè)出DNA復(fù)制活性，此技術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。
傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測(cè)方法不需要?jiǎng)×业腄NA變性，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識(shí)別位點(diǎn)，操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，大小卻只有BrdU抗體的1/500，很容易在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散；無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。
本試劑適用于小鼠、大鼠及其它動(dòng)物模型的各種組織器官的細(xì)胞增殖情況檢測(cè)。
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產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。4℃保存，有效期12個(gè)月。
使用方法
本試劑盒適用于各種動(dòng)物活體注射，穩(wěn)定性較好。注射標(biāo)記后可將目標(biāo)組織制備為石蠟或冰凍切片進(jìn)行EdU染色檢測(cè)。【注】：切片后可搭配EdU細(xì)胞增殖成像分析試劑盒（李記貨號(hào)：AC11L251）使用，進(jìn)行后續(xù)的切片EdU染色檢測(cè)。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，以1cm×1cm切片為例
實(shí)驗(yàn)前須知：EdU的分子量為252.223，易溶于水，PBS，生理鹽水等溶液，便于動(dòng)物注射使用。建議EdU的初始給藥量為5mg/kg，稀釋濃度為0.5-1mg/mL。具體動(dòng)物模型的注射劑量可根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行調(diào)節(jié)。【注】：我們根據(jù)每只小鼠20g的體重為例，10mg EdU粉末可以注射100只小鼠（100T）。
動(dòng)物EdU注射
【注】：①注射方式：依據(jù)實(shí)驗(yàn)決定，如：腹腔注射、皮下注射、肌肉注射、尾靜脈注射等方式。
②標(biāo)記時(shí)間：最佳標(biāo)記時(shí)間依據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?，增殖快速的組織及器官采用短時(shí)間標(biāo)記（<12 h）（例如小腸），增殖速度慢的組織及器官可采用長(zhǎng)時(shí)間標(biāo)記（如7 d或更長(zhǎng)時(shí)間，例如大腦）。
③標(biāo)記濃度：最佳標(biāo)記濃度依據(jù)具體實(shí)驗(yàn)而定。
④取樣部位：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ淮螛?biāo)記可對(duì)多種組織和器官進(jìn)行組織切片。因小腸上皮組織增殖速度較快，標(biāo)記時(shí)間較短（動(dòng)物注射6 d后取組織），建議預(yù)實(shí)驗(yàn)可以取小腸組織檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，作為陽(yáng)性對(duì)照。
切片處理
1.切片前處理：組織器官先進(jìn)行清洗，以去除血液、組織或器官中殘留的EdU，降低背景。
2.切片厚度：3-10um為宜，切片過厚可能影響切片背景。
3.切片后處理：①石蠟切片脫蠟：二甲苯洗脫3次，每次10 min，乙醇梯度（100%，95%，85%，75%）脫水各1次，去離子水洗脫1次。②冰凍切片處理：室溫放置30 min后，4℃丙酮固定10 min，PBS清洗3次，每次5 min。
4.2mg/mL 甘.an.suan清洗切片10 min。
5.加入100uL 0.5% Triton X-100細(xì)胞通透劑，室溫孵育10 min，再用PBS清洗1次。
后續(xù)進(jìn)行EdU染色步驟需要搭配EdU細(xì)胞增殖成像分析試劑盒（李記貨號(hào)：AC11L251）進(jìn)行以下步驟：
EdU染色
1.通過用10：1去離子水稀釋反應(yīng)緩沖液，進(jìn)行配制1×反應(yīng)緩沖液。
2.按照溶解200 mg緩沖添加劑溶于1 mL 去離子水的比例稱取適量的粉末進(jìn)行溶解，即為可用的緩沖添加劑的濃度，建議現(xiàn)用現(xiàn)配。
【注】：緩沖添加劑為白色粉末，較難準(zhǔn)確稱量，稱量范圍可稍微放寬，但是不應(yīng)超過±20%，且該粉末較易氧化，使用后請(qǐng)旋緊管蓋，如試劑出現(xiàn)棕黃色，則需報(bào)廢或更換。
3.按照以下的表格進(jìn)行染色反應(yīng)液的配制：

4.加入以上配置好的檢測(cè)混合液，以覆蓋組織為宜，避光、室溫孵育30 min。
5.棄染色反應(yīng)液，加入300 μL 0.5% Triton X-100細(xì)胞滲透液清洗2-3次，每次10 min。
6.棄細(xì)胞滲透液，用PBS洗兩次，每次 5 min。
其它染色（自備）
（可選）可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)抗原的抗體染色。
DNA染色
1.將Hoechst 33342 *超級(jí)純*（李記貨號(hào)：AC12L021）用PBS溶液1：1000進(jìn)行稀釋得到1×Hoechst染色液。
2.加入150 μL 1×Hoechst染色液，室溫避光孵育10-15 min后，棄染色液。
3.PBS清洗細(xì)胞2-3次，去掉洗液。
圖像獲取及分析
　　建議染色完成后立即進(jìn)行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請(qǐng)于4℃條件下避光濕潤(rùn)保存3 d之內(nèi)完成拍照。可使用抗熒光淬滅封片劑進(jìn)行封片后于4℃條件下保存及拍照檢測(cè)。

注意事項(xiàng)
1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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